功能性宠物食品的功效评价

　　功能性宠物食品的功效评价需要通过犬、猫动物试验来完成。根据动物伦理要求，评价功能性宠物食品的功效一般不进行破坏性试验，样本以血液、粪便、毛发和唾液等为主。

 

　　01、犬猫免疫调节功能的评价方法

 

　　免疫调节功能评价通常采集犬、猫的血液，进行免疫指标分析，以及免疫细胞试验和过敏性分析。

 

　　免疫分子可分为细胞因子类、血清蛋白类和免疫球蛋白类。其中，细胞因子类主要分析白细胞介素、干扰素和肿瘤坏死因子；血清蛋白类主要分析白蛋白、球蛋白和白球比；免疫球蛋白类一般测定血清中IgA，IgG，IgM，IgY等含量。免疫细胞试验主要为淋巴转化试验、淋巴细胞分型和迟发型变态反应，3种试验方法均是对犬、猫的血液或皮肤进行测试，不会对犬、猫造成较大伤害。

 

　　由于过敏反应发生较快，且有致命危险，对于犬、猫来说，多项过敏原试验不宜直接用动物进行，可以采用血清分析法进行体外过敏原测试。通过体外血清反应进行初步筛查后，再进行体内试验。

 

　　02、犬猫消化功能的评价方法

 

　　犬、猫消化功能评价主要从粪便评分、消化率、粪便代谢物和微生物群状态进行评估。

 

　　（1）粪便评分是犬、猫常用的临床诊断方法，通过对粪便黏稠度进行评分，可以直观地评定粪便质量，进而判断犬、猫对日粮的消化能力以及胃肠道的健康状况。常见的犬、猫粪便评分系统有Waltham粪便评分系统、威豪粪便评分系统以及基于图像和人工智能的粪便评分技术。

 

　　（2）消化率代表食物中能被机体吸收养分的百分比，是评价犬、猫消化能力最直接有效的指标之一，也是宠物食品品质重要的评估标准。动物饲养试验是测定消化率较准确的方法。美国饲料管理协会（AAFCO）推荐先用测试日粮进行5~7 d的适应性饲养，然后收集5 d粪便用于消化率的测定。

 

　　（3）微生物群的状态可以反映犬、猫的胃肠道功能。微生物群状态指标主要有微生物群组成和功能特性测量，其中微生物群组成指标包括微生物群的相对丰度以及微生态失调程度，微生态失调程度可用于描述“有害共生微生物群成分的改变”。

 

　　（4）此外，还可以通过分析粪便代谢物指标评价犬、猫的消化功能，包括脂质代谢中的脂肪酸（如短链脂肪酸），氨基酸及其衍生物（如吲哚-3-乙酸），胆汁酸及其衍生物，碳水化合物及其代谢产物，以及其他代谢物（如羟基苯乳酸）等。

 

　　03、犬猫衰老的评价方法

 

　　目前，国内外尚无评价犬、猫衰老的标准方法，一般可以从宏观和微观层面对犬、猫的衰老状况进行评估。

 

　　（1）在宏观层面，犬、猫的衰老状况可通过身体变化进行评估，包括外形、体重、肌肉含量、毛发、牙齿状况、运动状态、步态分析、行为认知等。行为学和认知试验，如旷场试验、指示试验、记忆试验等可以对犬、猫的记忆力和认知能力进行风险评估。老年犬通常表现出行走速度减慢、记忆力和认知能力下降等特征。此外，犬、猫毛发的变化也是判断其衰老的重要指标，皮毛质量下降可能说明它们已进入老年期。体重和肌肉含量的变化及牙齿的磨损程度均能反映犬、猫的年龄，一般来说，老年犬的体重和肌肉含量下降，牙齿磨损程度增加。

 

　　（2）在微观层面，通过分析犬、猫体内代谢物中的衰老标志物可以判断其衰老状况。可以对抗氧化指标、免疫指标、组织学形态、细胞凋亡状况、线粒体相关蛋白质、遗传指标等衰老标志物进行鉴定。抗氧化指标中的超氧化物歧化酶、丙二醛、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、总抗氧化能力等，能反映机体的氧化应激状态；免疫指标中的NLRP3，IL-18，IL-1β可以揭示免疫系统的衰老状况；在组织学和细胞学分析中，通过组织切片Tunel染色可以观察细胞凋亡状况；线粒体相关的蛋白质（包括MFN1，MFN2和COX Ⅳ等）能反映线粒体功能；遗传指标中的DNA甲基化模式会随着年龄的增长发生变化，可以建立表观遗传时钟等预测模型。

 

　　此外，与衰老相关基因（如NAT1，PBX1，CREG1，DYNC1I1，PDE11A，TNFSF13B，BCAS3，OAS2，RRM2和DMC1等）的表达，也可用于评价犬、猫的衰老状况。

 

　　04、犬猫毛发的评价方法

 

　　科学合理的毛发质量评价方法可以清晰地展现犬、猫毛发质量的变化，有助于进一步判断营养调控的有效性。目前，评价犬、猫毛发的方法主要有以下几种：

 

　　（1）毛发评分。宠物犬、猫毛发的感官评定方法最早由Rees等提出并使用，宠物犬、猫毛发状态评分标准见表1。

 

表1 宠物犬、猫毛发状态评分标准

 

　　（2）毛发拉断峰值力和胱氨酸含量。单达聪在猫粮中添加亮毛因子，通过毛发拉断峰值力和胱氨酸含量对猫的毛发品质进行评估，其中毛发拉断峰值力采用MARK-10拉力计测定，记录毛发拉断时的瞬时拉力值。

 

　　（3）毛发感官品质。毛发感官品质评价指标包括毛发手感力度、光亮度和柔顺度。手感力度以抚摸犬、猫毛发时的作用力度为标准；光亮度评分需在自然光条件下，保持观测位置不变，毛发越有光泽，光亮度评分越高；柔顺度评分需评分者用手沿犬、猫毛发生长方向抚摸，毛发柔顺程度越高，评分越高。

 

　　（4）毛发色差值。有研究表明，毛发色差值可用色差仪测试，刘策等使用手持式色差仪测定不同宠物毛发的色差值，包括亮度值、红度值、黄度值、计算值饱和度以及色度角，发现色差值黄度值与饱和度值可用于评估和区分不同品种宠物间毛发的颜色差异。

 

　　（5）毛发鳞片结构。使用电子显微镜可观察毛发的鳞片结构，鳞片结构是评价毛发质量的重要指标。鳞片的厚度、密度、形状和排列结构可以直接影响毛发的手感力度、光亮度和柔顺度等性状。

 

　　（6）近红外光谱技术分析。近红外光谱技术作为一种快速无损的检测方法，在许多领域中广泛运用。Lab Spec Pro便携式光谱仪可以收集350~2 500 nm的光谱，可以根据毛发的亮度和纹理，使用视觉评分（1稀缺，2良好，3最佳）来评估毛发质量。

 

　　05、犬猫肥胖的评价方法

 

　　犬、猫肥胖的评价方法主要有3种：体况评分、体脂判断和血清肥胖相关指标评估。

 

　　（1）体况评分系统是目前使用较广泛和简便的身体脂肪评估方法。常见的体况评分系统有5分制和9分制。

 

　　（2）体脂判断是评估犬、猫肥胖的重要指标。氧化氚稀释和双能X线吸收测定法被认为是估计体脂量的准确方法，该方法是非侵入性的，不会对动物造成伤害。CT或核磁共振扫描也可以了解体脂分布，如内脏脂肪含量。此外，DEXA扫描也是一种准确的体脂测量方法，可以检测体脂成分和骨密度。

 

　　（3）血清肥胖相关指标评估是一种定量评价犬、猫肥胖的方法。一般在犬、猫禁食10~12 h后采集其血清样品，进行肥胖相关指标测定。通过检测血脂指标（如TC，TG，HDL-C，LDL-C）、血糖指标（如空腹血糖和糖化血红蛋白）、肝功能指标（如ALT、AST总胆红素和直接胆红素）、炎症标志物（如IL-6和hs-CRP等肥胖相关的低水平慢性炎症标志物）以及瘦素脂联素等指标，反映犬、猫肥胖和脂质代谢情况。

 

　　06、犬猫泌尿功能的评价方法

 

　　犬猫泌尿系统健康是功能性宠物食品研发的重要方向，其评价需结合尿液指标、影像学检查及行为学观察，重点关注结石预防、尿道健康维护。以下为系统性评价方法：（

 

　　1）尿液pH值动态监测

 

　　测试方法：使用精密pH试纸或pH计，连续7天采集晨尿测定pH值。评价标准：犬：目标pH 6.0-7.0（预防鸟粪石结石需<6.5）。猫：目标pH 6.0-6.5（公猫尿道结石风险高，需严格控制碱性尿）。

 

　　（2）尿比重（USG）

 

　　测试方法：折射仪测尿比重（USG）。评价标准：健康犬：USG 1.015-1.045。健康猫：USG 1.035-1.060。

 

　　（3）尿沉渣结晶与管型分析

 

　　测试方法：离心法（1500rpm，5分钟）制备尿沉渣，显微镜观察结晶类型及管型。评价标准：鸟粪石结晶（猫常见）：提示碱性尿，需酸化尿液。草酸钙结晶：提示酸性尿或高钙饮食，需限制钙摄入。颗粒管型：提示肾小管损伤，需评估肾功能。

 

　　07、犬猫应激的评价方法

 

　　犬、猫应激综合评价方法和标准主要有以下几个方面：

 

　　（1）行为指标评估。可以通过观察动物的行为变化来进行：皮毛变化（如皮毛粘连、不洁，竖起的毛发可能代表疼痛或应激）；活动性、性格和态度的改变（如烦躁、昏沉、不想移动或攻击性变化）；表情变化（目光呆滞、瞳孔放大、耳朵收起、面部扭曲、嗜睡或畏光）以及一些其他的不正常行为表现。

 

　　（2）生理生化指标评估。血液生化指标的变化，如血糖含量、皮质类固醇和肾上腺素的水平等可以作为评估犬、猫应激的生理生化指标。

 

　　（3）猫应激评分。猫应激评分是一种评估猫应激反应的方法，通过结合血清炎性因子、激素、五羟色胺和热休克蛋白-70水平等生物标志物，能准确高效地诊断猫的急性应激反应。

 

　　（4）心率和行为评分。在猫的应激评估中，心率以及恐惧、焦虑和压力（FAS）行为指标的评分是重要的评估标准。心率可通过听诊测量，FAS可通过5种特定行为进行评估，评分为0或1，并在每个评估期求和，依据总分进行判定。